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shRNA设计及载体构建
一、技术简介
RNA干扰技术是现代生物领域研究中一项重要的突破性技术，已经被广泛应用于RNA干扰靶点识别及确认。以载体为基础的shRNA方法，由于其易于转入细胞以及能够实现持续表达的特性，越来越受到RNAi技术研究者的青睐。
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。简单的说是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默，是一种特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing and transgene silencing)。shRNAs (RNA-Short hairpin RNAs)：即短发夹RNA，是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，可通过RNA干扰来抑制基因的表达。
二、实验流程
1. shRNA表达载体的选用：根据客户的需要选用不同的质粒载体。
2. 设计RNAi靶序列与反向互补序列。
3. shRNA质粒载体构建：合成模板、双酶切shRNA空载体、连接与转化、测序鉴定、质粒制备及定量。
4. 转染，筛选稳定表达细胞系。转染方法包括：磷酸钙转染、脂质体转染、电穿孔转染等。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：客户需提供基因名称，插入片段序列或NCBI登录号等信息。
2. 公司提供：shRNA序列及合成后的产物，以及成功构建的shRNA载体及测序结果。
3. 试验周期：20-30个工作日，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
4. 质量承诺：我们可为您提供高质量的shRNA序列，并为您构建到shRNA真核表达载体上。shRNA序列有效性≥70%。
